組換えタンパク質抗原にはいくつかの異なるエピトープがあり、その一部は配列エピトープであり、一部は構造エピトープです。変性抗原で動物を免疫することによって得られたポリクローナル抗体は、個々のエピトープに特異的な抗体の混合物であり、一般的に自然構造または変性標的タンパク質を検出するために使用できます。変性したタンパク質を免疫原性として使用することの副次的な利点は、変性タンパク質がより免疫原性がある傾向があり、動物の強い免疫応答を刺激できることです。
大腸菌の発現システムは、時間とお金の点で最も費用のかかるシステムであるため、通常、抗原目的で選択されます。標的タンパク質の発現の可能性と精製の利便性を改善するために、特定のドメインなどの標的タンパク質の小さな断片のみが発現する場合があります。
タンパク質の3次元構造
タンパク質の特定のドメイン
抗体調製の目的がWB検出のみである場合、合成小ペプチドを抗原として使用することは経済的かつ迅速ですが、ペプチドセグメントの不適切な選択により、弱い免疫原性または非再生性のリスクがあります。抗体調製には長期間が必要なため、実験の成功率を確保するために、ポリペプチド抗原を使用した抗体を調製するために2つまたは3つの異なるペプチドセグメントがしばしば選択されます。
予防接種のためのポリペプチド抗原の純度は、80%を超える必要があります。より高い純度は理論的に特異性を備えた抗体を得ることができますが、実際には、動物は常に多数の非特異的抗体を生成し、抗原純度の利点を隠しています。
さらに、小さなペプチドからの抗体の調製は、免疫原性を高めるために適切なキャリア抗原に架橋する必要があります。 2つの一般的な抗原キャリアはKLHとBSAです。
投稿時間:2025-07-03