HPLC で最も失敗しやすいものとその解決策

HPLC は高精度の機器であるため、使用中に正しい方法で操作しないと、厄介な小さな問題が発生しやすくなります。最も一般的な問題の 1 つは、列圧縮の問題です。故障したクロマトグラフを迅速にトラブルシューティングする方法。HPLC システムは主にリザーバーボトル、ポンプ、インジェクター、カラム、カラム温度室、検出器、データ処理システムで構成されています。システム全体にとって、支柱、ポンプ、検出器は重要なコンポーネントであり、問​​題が発生しやすい主な場所です。

カラム圧力の鍵は、HPLC を使用する際に細心の注意が必要な領域です。カラム圧力の安定性は、クロマトグラフィーのピーク形状、カラム効率、分離効率、保持時間と密接に関係しています。カラム圧力の安定性とは、圧力値が安定した値で安定していることを意味するのではなく、圧力変動範囲が 345kPa または 50PSI の間であることを意味します (カラム圧力が安定してゆっくりと変化する場合にグラジエント溶出の使用が可能)。圧力が高すぎるか低すぎることは、カラム圧力の問題です。

HPLC で最も失敗しやすいものとその解決策

1、高圧は HPLC の使用において最も一般的な問題です。これは圧力が急激に上昇することを意味します。一般に、次の理由が考えられます。 (1) 一般に、これは流路の詰まりが原因です。この時点では、区分的に検討する必要があります。ａ．まず、真空ポンプの入口を切ります。この時点で、PEEK チューブが溶媒ボトルより小さくなるように PEEK チューブに液体を満たし、液体が自由に滴るかどうかを確認しました。液体が滴下していない場合、または滴下が遅い場合は、溶媒フィルターヘッドが詰まっています。処理: 30% 硝酸に 30 分間浸し、超純水ですすいでください。液体がランダムに滴る場合は、溶剤フィルター ヘッドは正常であり、チェック中です。b.移動相がカラムを通過しないようにパージ バルブを開け、圧力が大幅に低下しないとフィルターの白いヘッドが詰まります。処理: 濾過した白ニキビを除去し、10% イソプロパノールで 30 分間超音波処理しました。圧力が 100PSI 未満に低下すると、濾過された白いヘッドは正常であり、チェックされています。c.カラムの出口端を取り外します。圧力が下がらない場合は、カラムが詰まっています。処置: 緩衝塩による詰まりの場合は、圧力が正常になるまで 95% を洗い流します。より保存性の高い物質が障害の原因となっている場合は、現在の移動相よりも強い流れを使用して常圧に向かって急ぐ必要があります。上記の方法で長期間洗浄圧力が下がらない場合は、逆にカラムの入口と出口が機器に接続されているとみなして、移動相でカラムを洗浄することができます。このとき、カラム圧力が下がらない場合はカラム入口シーブプレートを交換するしかありませんが、一度動作が悪くなるとカラム効果の低下につながりやすいので、使用量は少なくするようにしてください。困難な問題の場合は、カラムの交換が検討される場合があります。

(2) 誤った流量設定：正しい流量を再設定できます。

(3) 不正確な流量比: 流れの比率が異なると粘度指数が異なり、粘度が高い流れの対応するシステム圧力も大きくなります。可能であれば、より粘度の低い溶媒を交換するか、再設定して準備することができます。

(4) システム圧力ゼロドリフト: 液面センサーのゼロを調整します。

2、圧力が低すぎる (1) は通常、システムの漏れが原因で発生します。対処法: 各接続部、特にカラムの両端の界面を見つけて、リーク領域を締めます。ポストを取り外し、適切な力で PTFE フィルムを締めるか裏打ちします。

(2) ガスはポンプに入りますが、この時の圧力は通常、高いときも低いときもあり不安定です。さらに深刻なのは、ポンプが液体を吸収できなくなることです。処理方法：洗浄バルブを開け、3～5ml/minの流量で洗浄します。そうでない場合は、専用の針管を使用して排気バルブで気泡を吸引しました。

(3) 移動相の流出がない: リザーバーボトルに移動相があるかどうか、シンクが移動相に浸かっているかどうか、ポンプが作動しているかどうかを確認します。

(4) リファレンスバルブが閉じていない：減速後にリファレンスバルブが閉じます。通常は 0.1 まで下がります。基準バルブを閉じた後は ~ 0.2 mL/min。

まとめ：

この論文では、液体クロマトグラフィーでよくある問題のみを分析します。もちろん、実際のアプリケーションでは、さらに他の問題に遭遇することになります。障害処理では、次の原則に従う必要があります。仮説上の要因と問題の関係を判断するには、一度に 1 つの要因のみを変更してください。一般に、トラブルシューティングのために部品を交換する場合は、無駄を防ぐために、分解した元の部品を元の位置に戻すことに注意する必要があります。良好な記録習慣を身に付けることが、障害処理を成功させる鍵となります。結論として、HPLC を使用する場合は、サンプルの前処理と装置の適切な操作とメンテナンスに注意を払うことが重要です。