組換えタンパク質抗原は、多くの場合、いくつかの異なるエピトープを持ち、その一部は配列エピトープであり、一部は構造エピトープです。変性抗原で動物を免疫することによって得られるポリクローナル抗体は、個々のエピトープに特異的な抗体の混合物であり、一般に天然構造または変性標的タンパク質の検出に使用できます。変性タンパク質を免疫原として使用する副次的な利点は、変性タンパク質は免疫原性が高くなる傾向があり、動物の強い免疫反応を刺激する可能性があることです。
大腸菌の発現系は、時間と費用の点で最も高価な系であるため、通常、抗原目的で選択されます。標的タンパク質の発現の可能性と精製の利便性を向上させるために、標的タンパク質の特定のドメインなどの小さな断片のみが発現される場合があります。
タンパク質の立体構造
タンパク質の特定のドメイン
wb検出のみを目的とした抗体作製の場合、合成低分子ペプチドを抗原として使用するのが経済的かつ迅速ですが、ペプチドセグメントの選択が不適切なため、免疫原性が弱かったり、非再生性となるリスクがあります。抗体の作製には長期間を要するため、実験の成功率を確保するために、ポリペプチド抗原を用いて抗体を作製する場合には、2つまたは3つの異なるペプチドセグメントが選択されることがよくあります。
免疫化のためのポリペプチド抗原の純度は 80% 以上である必要があります。理論的には純度が高いほど特異性の高い抗体を得ることができますが、実際には動物は常に多数の非特異的抗体を産生するため、抗原純度の利点が隠蔽されます。
さらに、小さなペプチドからの抗体の調製では、免疫原性を高めるために適切なキャリア抗原に架橋する必要があります。2 つの一般的な抗原キャリアは、KLH と BSA です。
投稿日時: 2023 年 3 月 23 日