フレットペプチド技術

蛍光共鳴エネルギー伝達（FRET）

蛍光共鳴エネルギー伝達（FRET）は、分子間の電気カップルの相互作用を通じて、ドナー励起状態エネルギーがアクセプター励起状態に伝達される非放射エネルギー伝達プロセスです。このプロセスは光子を含むものではないため、非放射性です。このアッセイには、速く、敏感で、シンプルであるという利点があります。

FRETアッセイで使用される染料は同一である可能性があります。しかし、ほとんどの用途では、実際に異なる染料が使用されています。手短に言えば、明るい共鳴エネルギーの移動は、ドナーグループが励起されたときのドナー（染料1）からアクセプター（染料2）への双極子のペアの移動です。一般に、ドナーフルオロフォアグループの排出スペクトルは、アクセプターグループの吸収スペクトルと重複しています。 「2つのフルオロフォア間の距離が適切である場合（10 - 100 A）、ドナーからアクセプターへのフルオロフォアエネルギーの移動を観察できます。」エネルギー移動の方法は、受容体の化学構造に依存します。

1。分子振動に変換されます。つまり、エネルギー伝達の明るい光が消えます。 （受容体は軽いクエンチャーです）

2。放出は受容体自体よりも強烈であり、二次蛍光スペクトルに赤方偏移をもたらします。」 （受容体は発光エミッターです）。

ドナー群（edans）およびアクセプター遺伝子（ダブシル）は、HIVプロテアーゼの天然基質に均一にリンクされており、基質が切断されない場合、ダブシルはエダンを排除でき、フッ素に検出できなくなります。 HIV-1プロテアーゼの切断により、edansはダブシルによって消光されなくなり、その後、エダンズルシフェラーゼを検出できます。プロテアーゼ阻害剤の利用可能性は、Edansの蛍光強度の変化によって監視できます。

FRETペプチドは、ペプチダーゼ非特異性を研究するための便利なツールです。その反応プロセスは継続的に監視できるため、酵素活性を検出するための便利な方法を提供します。ドナー/アクセプターによってペプチド結合の加水分解後に生成された光沢は、ナノモル濃度での酵素活性の尺度を提供します。フレットペプチドが無傷の場合、内部フラッシュの突然の消失を示しますが、ドナー/アクセプターの反対側のペプチド結合が破損すると、フラッシュが解放され、連続的に検出され、酵素活性を定量化できます。